Chaetomium erraticum dekstranaz enziminin amino grubu ile fonksiyonellştirilmiş çok duvarlı karbon nano tüpler üzerine adsorpsiyon yöntemi ile immobilizasyonu

Abstract

Bu tez çalışmasında, Chaetomium erraticum dekstranazı (CED), amino çok duvarlı karbon nanotüpler (MWCNT-NH2) üzerine adsorpsiyon yöntemiyle immobilize edilmiştir. İmmobilizasyon tamponunun pH'sı ve derişimi, MWCNT-NH2 miktarı ve immobilizasyon süresi optimize edilerek %100 immobilizasyon verimi ve % 137.5 aktivite verimi elde edilmiştir. İmmobilize CED (ICED) ve serbest CED (FCED)'in karakterizasyonu yapılmış ve immobilizasyon sonrasında CED'in optimum pH değeri 5.0'den 5.0-6.0'e aralığına genişlemiş, ancak optimum sıcaklık (55°C) değişmemiştir. Ayrıca, Lineweaver-Burk grafiği kullanılarak FCED ve ICED'in kinetik sabitleri belirlenmiştir. Dekstran substratı kullanıldığında, FCEDve ICED'in Km değerleri sırasıyla 325.7 g/L ve 211.9 g/L olarak hesaplanmış, Vmax değerleri ise sırasıyla 2785.5 µmol/ml.dk ve 6211.2 µmol/ml.dk olarak bulunmuştur. Art arda tekrar edilen 20 kullanım sonrası ve optimum koşullarda 20 günlük depolama sonrası ICED'in başlangıç aktivitesinde bir azalma gözlemlenmemiştir. Sonuç olarak, bu tez çalışmasından elde edilen ICED, gıda endüstrisinde dekstranın hidrolizi ve dekstrandan IMO üretimi uygulamalarında etkin bir şekilde kullanılabilir.In this thesis study, Chaetomium erraticum dextranase (CED) was immobilized onto amino-functionalized multi-walled carbon nanotubes (MWCNT-NH2) using the adsorption method. The immobilization buffer's pH and concentration, the amount of MWCNT-NH2, and the immobilization duration were optimized to achieve 100% immobilization efficiency and 137.5% activity yield. The characterization of immobilized CED (ICED) and free CED (FCED) was performed. After immobilization, the optimum pH value of CED expanded from 5.0 to the range of 5.0-6.0 ranges, while the optimum temperature (55°C) remained unchanged. Additionally, the kinetic constants for FCED and ICED were determined using the Lineweaver-Burk plot. When dextran substrate was used, the Km values for FCED and ICED were calculated as 325.7 g/L and 211.9 g/L, respectively, while the Vmax values were 2785.5 µmol/ml.min and 6211.2 µmol/ml.min, respectively. No significant decrease in initial activity was observed for ICED after 20 consecutive uses and 20 days of storage under optimal conditions. As a result, the ICED obtained from this thesis study can be used effectively in the hydrolysis of dextran and IMO production from dextran applications in the food industry.