Bitlis budaklı kaplıcasından izole edilen bacillus licheniformis vo2 ve bacillus licheniformis vo9’dan katı faz fermantasyon yöntemiyle β-galaktosidaz üretiminin araştırılması

Abstract

Bu çalışmada Bitlis Budaklı Kaplıcalarından alınan çamur örneklerinden izole edilen termotolerant VO2 ve VO9 izolatları biyolojik materyal olarak kullanıldı. Morfolojik ve biyokimyasal testler ile16S rRNA gen dizisi analizine dayanarak, izolatların Bacillus cinsine ait olduğu ve Bacillus licheniformis ile yakından ilişkili olduğu belirlendi. İzolatlar kullanılarak katı faz fermentasyon (KFF) yöntemiyle β-Galaktosidaz üretimine, inkübasyon zamanı, sıcaklık, pH, karbon ve azot kaynakları, metal tuzları ve surfaktanlar gibi farklı parametlerin etkisi araştırıldı. β-Galaktosidaz için optimum üretim koşulları; inkübasyon zamanı, sıcaklık, pH ve katı substrat VO2 için 72 saat, 45ºC, 7.0 ve pirinç kabuğu olarak bulunurken, VO9 için 96 saat, 40ºC, 6.0 ve mercimek kabuğu olarak elde edilmiştir.Uygun ekim miktarı VO2 izolatı için % 25 (1.816±0.063 U/mg) olarak tespit edilirken, VO9 için ise %30 olarak tespit edildi (1.494±0.056 U/mg). Her iki izolatta da enzim üretimi için katı faz fermentasyon ortamına karbon kaynağı olarak laktoz eklendiğinde ve surfaktan olarak Triton X-100 eklendiğinde enzim üretiminin arttığı tespit edildi. 65ºC’de 4 ve 12 saat ön inkübasyona bırakılan β-Galaktosidaz VO2 için aktivitesini sırasıyla %84 ve %72 oranında korurken, VO9 tarafından üretilen enzimin ise aynı koşullarda aktivitesini %60 ve %48 oranında koruduğu gözlendi.