Hindi Karaciğerinden NADPH-Sitokrom P450 Redüktaz’ın Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Bazı Metal İyonlarının Enzim Aktivitesi Üzerindeki Etkileri

Abstract

NADPH-Sitokrom P450 redüktaz (CPR) enzimi, detoksifikasyon metabolizmasında elektron transferinikatalizleyen anahtar bir enzimdir. Bu çalışmada, hindi karaciğer mikrozomlarından CPR enziminin saflaştırılmasıiçin iki yöntem kullanılmıştır. Birinci yöntemde, CPR enzimi ~114 saflaştırma katsayısıyla ve ~%23 verimle2’, 5’-ADP Sefaroz 4B afinite kolonu kullanılarak saflaştırılmıştır. İkinci yöntemde, CPR, DE-52 selüloz anyondeğişim kolonu ve 2’, 5’-ADP Sefaroz 4B afinite kolonu kullanılarak, ~124’lük saflaştırma katsayısı ve %8verimle saflaştırılmıştır. Enzim saflığı her iki yöntemde de SDS-PAGE ile kontrol edilmiştir. Saflaştırılmış enziminkarakteristik kinetik özellikleri belirlenmiştir. Bazı metal iyonlarının saflaştırılmış CPR enzim aktivitesi üzerindekietkileri in vitro şartlarda araştırılmıştır. Ag+, Hg2+ ve Cu2+ metal iyonlarının CPR enzim aktivitesi üzerinde inhibisyonetkisi gösterdiği tespit edilmiştir.